MANUAL TÉCNICO DE EXTRACCIÓN DE ADN FOLIAR DE CARYOCAR BRASILIENSE (CARYOCARACEAE). PROTOCOLO ESTANDARIZADO PARA LA OBTENCIÓN DE ADN GENÓMICO DE ALTA CALIDAD EN ESPECIES DEL CERRADO

Resumen

El pequizeiro (Caryocar brasiliense Cambess.) es una especie arbórea nativa del Cerrado brasileño de gran importancia ecológica, económica y sociocultural. A pesar de su relevancia, los estudios moleculares que involucran esta especie a menudo enfrentan dificultades relacionadas con la extracción de ADN de alta calidad, debido a la elevada concentración de compuestos fenólicos y otros metabolitos secundarios presentes en los tejidos vegetales. Este manual presenta un protocolo estandarizado y optimizado para la extracción de ADN genómico a partir de hojas de C. brasiliense, basado en el método clásico de Doyle y Doyle (1987) y adaptado a las particularidades de la especie. El procedimiento incluye etapas de recolección y conservación adecuada del material vegetal, maceración con nitrógeno líquido, extracción con tampón CTAB, purificación con cloroformo:alcohol isoamílico y precipitación alcohólica del ADN. También se describen orientaciones para la cuantificación y evaluación de la calidad del ADN obtenido mediante espectrofotometría y electroforesis en gel de agarosa. Además, se discute el uso de Albúmina Sérica Bovina (BSA) en reacciones de PCR como estrategia para minimizar la acción de compuestos inhibidores y mejorar la eficiencia de la amplificación. El protocolo propuesto presenta buena reproducibilidad y rendimiento, produciendo ADN de alta integridad y pureza, adecuado para diferentes análisis moleculares, como ISSR y SSR. De este modo, el manual constituye una herramienta metodológica relevante para estudios de genética de la conservación, estructura poblacional, biotecnología y manejo sostenible del pequizeiro.