MANUAL TÉCNICO DE EXTRAÇÃO DE DNA FOLIAR DE CARYOCAR BRASILIENSE (CARYOCARACEAE). PROTOCOLO PADRONIZADO PARA OBTENÇÃO DE DNA GENÔMICO DE ALTA QUALIDADE EM ESPÉCIES DO CERRADO

Resumo

O pequizeiro (Caryocar brasiliense Cambess.) é uma espécie arbórea nativa do Cerrado brasileiro de grande importância ecológica, econômica e sociocultural. Apesar de sua relevância, estudos moleculares envolvendo a espécie frequentemente enfrentam dificuldades relacionadas à extração de DNA de alta qualidade, devido à elevada concentração de compostos fenólicos e outros metabólitos secundários presentes nos tecidos vegetais. Este manual apresenta um protocolo padronizado e otimizado para a extração de DNA genômico a partir de folhas de C. brasiliense, baseado no método clássico de Doyle e Doyle (1987) e adaptado para as particularidades da espécie. O procedimento envolve etapas de coleta e conservação adequada do material vegetal, maceração com nitrogênio líquido, extração com tampão CTAB, purificação com clorofórmio:álcool isoamílico e precipitação alcoólica do DNA. Também são descritas orientações para quantificação e avaliação da qualidade do DNA obtido por espectrofotometria e eletroforese em gel de agarose. Adicionalmente, discute-se o uso da Albumina Sérica Bovina (BSA) em reações de PCR como estratégia para minimizar a ação de compostos inibidores e melhorar a eficiência da amplificação. O protocolo proposto apresenta boa reprodutibilidade e rendimento, produzindo DNA de elevada integridade e pureza, adequado para diferentes análises moleculares, como ISSR e SSR. Dessa forma, o manual constitui uma ferramenta metodológica relevante para estudos de genética da conservação, estrutura populacional, biotecnologia e manejo sustentável do pequizeiro.